008120522s2011    kjka     t QB 000a  korIA
 056  ▼a520.7▼24
 090  ▼a520.7▼b농239ㅈ
 110  ▼a농림수산식품부▼b과학기술정책과
 24500▼a재조합 대장균으로부터 세로토닌유도체 생산과 기능성 화장품 소재개발 및 제품화▼d농림수산식품부 과학기술정책과▼e전남대학교 [공편]
 260  ▼a[광주]▼b전남대학교▼c2011
 300  ▼axⅳ, 85 p.▼b삽도▼c30 cm
 44000▼a최종연구보고서
 50000▼a연구책임자 : 백경환
 50010▼a발간등록번호 : 11-1541000-001033-01
 504  ▼a참고문헌 : p.82-85
 7001 ▼a백경환
 710  ▼a전남대학교
 710  ▼a농림부
 710  ▼a농수산부
 710  ▼a농림수산부
 710  ▼a농림축산식품부
 856  ▼uhttp://library.mafra.go.kr/skyblueimage/5708
 9501 ▼a비매품

제1장  연구개발과제의 개요 = 1

  제1절  연구개발의 목적 및 필요성 = 1

  제2절  연구개발 범위 = 5


제2장  국내외 기술개발 현황 = 7

  제1절  본 연구진의 선행연구결과 = 7

  제2절  국내·외 타 연구기관의 연구내용 및 결과 = 11


제3장  연군개발수행 내용 및 결과 = 14

  제1절  재조합 대장균을 이용한 새로토닌유도체 대량생산 연구 = 14

    1. 서설 = 14

    2. 연구 수행 방법 = 15

      가. 4CL2와 SHT 유전자가 발현된 재조합 대장균 제작 = 15

      나. 재조합 E. coli 에서 serotonin 유도체 정량 = 16

      다. Western blotting과 SHT 효소 활성 측정 = 16

      라. 4CL2와 SHT 유전자가 발현된 재조합 대장균 제작 = 17

      마. 4CL2와 SHT 유전자의 peroplasm 발현 = 17

      바. PelB-SHT 및 PelB-4CL2 동시발현 벡터 구조물 제작 = 17

      사. 재조합 E. coli에서 PAs 정량 = 18

      아. 벡터 제작 및 대장균에서 THT와 4CL 발현 = 18

      자. 벼 4CL2와 SHT 유전자가 발현된 재조합 대장균 제작 = 19

      차. 대장균에서 TDC와 T5H 유전자 공동발현을 통한 세로토닌 생산 = 19

      카. 트립토판 처리에 따른 serotonin 생성물 측정 방법 = 20

    3. 연구 수행 결과 = 20

      가. 애기장대 4CL2(At4CL2) 와 SHT 동시발현 재조합 대장균의 세로토닌 유도체 생산 = 20

      나. SHT와 4CL2의 periplasm 발현 및 SHT+4CL2 동시발현 = 25

      다. THT와 4CL2의 동시발현 대장균 발현 및 세로토닌유도체 생합성 = 27

      라. TDC와 T5H의 동시발현 대장균 발현 및 세로토닌 생합성 = 31  

  제2절  세로토닌 유도체의 항염증성 피부질환 개선제로서의 효능 분석 = 38

    1. 서설 = 38

    2. 연구 수행 방법 = 39

      가. 세포배양 = 39

      나. 세포생장분석 = 40

      다. 세포내 ROS(Reactive Oxygen Species) 생성 측정 = 40

      라. 지질과산화 분석 = 40

      마. RNA 발현 분석 = 40

      바. 단밸질 발현 분석 = 41

      사. 항산화 물질이 피부세포에서 단백질의 carbonylation에 미치는 영향 = 41

      아. 산화적 스트레스에 의한 H2AX 단백 인산화에 미치는 영향 = 41

      자. 산화적 스트레스로 인한 세포 내 단백 인산화 분석 = 42

      차. Invasion assay = 42

      카. Migration assay = 42

      타. 세포주기 FACS 분석 = 42

    3. 연구 수행 결과 = 42

      가. 세로토닌 전구체가 사람 피부세포 생장에 미치는 영향 분석 = 43

      나. 산화적 스트레스로부터 피부세포 보호하는 항산화 활성 분석 = 43

      다. 세포내 유해산소(ROS) 생성 억제 활성 분석 = 43

      라. 지질과산화 억제 활성 분석 = 44

      마. CaS 의 세포 생장 촉진 활성 분석 = 45

      바. 세로토닌 전구체의 산화적 스트레스로 인한 DNA 손상 방어 활성 분석 = 46

      사. 산화적 스트레스로 인한 단백질 carbonylation 분석 및 세로토닌 유도체의 활성 분석 = 46

      아. 산화적 스트레스에 의한 세포내 단백 인산화 분석 = 47

      자. 과산화수소에 의한 피부세포 독성 분석 = 48

      차. CaS의 항염증 효능 분석 = 49

      카. Integrin 유전자 발현 영향 분석 = 50

  제3절  세로토닌유도체를 이용한 기능성 화장품 소재 및 제품개발 = 52

    1. 서설 = 52

    2. 연구 수행 방법 = 52

      가. 세포배양 = 52

      나. Melanin conttent assay = 53

      다. NF-kB activity assay = 53

      라. Collagen synthesis assay = 53

      마. Collagenase activity inhibition assay = 54

      바. 지방전구세포 3T3L1 분화 = 54

      사. TGF-beta 생산 assay = 55

      아. Fibronectin 발현 = 55

      자. 피부일차자극시험 = 55

      차. 세로토닌 유도체의 pH, 열 안정성 시험 = 55

      카. 분광광도계에 따른 성상 관찰 = 56

      타. 세로토닌 유도체의 리포좀 원료 피부투과시험 = 56

    3. 연구 수행 결과 = 57

      가. 세로토닌 유도체가 B16 melanoma 세포의 멜라닌 생성에 미치는 영향 분석 = 57

      나. 세로토닌 유도체가 NIH 3T3의 NF-kB의 활성에 미치는 영향 분석 = 57

      다. 세로토닌 유도체가 인체유래 섬유아세포 콜라겐 생성에 미치는 영향 분석 = 58

      라. 세로토닌 전구체가 인체유래 섬유아세포의 콜라게네이즈 MMP-1 활성에 미치는 영향 분석 = 59

      마. 세로토닌 전구체가 3T3L1 지방전구세포 분화에 미치는 영향 분석 = 59

      바. 세로토닌 전구체가 3T3L1 전구지방세포 TG 생산에 미치는 영향 분석 = 60

      사. 유효물질의 작용 기전 규명(켈로이드억제관련) = 60

      아. 세로토닌 유도체의 물리, 화학적 특성 규명 = 62

      자. 세로토닌 유도체의 인체사용에 따른 안전성 시험 = 65

      차. 유효물질에 대한 원료화 및 CTFA 등재 = 65

      카. 세로토닌과 쿠마로일세로토닌 전구체가 3T3L1 지방전구세포 분화에 미치는 영향 비교 = 68

      타. 원료 제형연구 (피부투과도 및 안정성 향상) = 70

      파. 시제품 개발 = 72


제4장  목표달성도 및 관련분야에의 기여도 = 73


제5장  연구개발 성과 및 성과활용 계획 = 76

  제1절  연구 성과 = 76

  제2절  타 연구에의 응용 = 78


제6장  연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 = 80


제7장  참고문헌 = 82