서해 특산 다모류로부터 유용신물질의 특성 및 응용성 연구 / 해양수산부 ; 인하대학교 [공편]
![서해 특산 다모류로부터 유용신물질의 특성 및 응용성 연구 / 해양수산부 ; 인하대학교 [공편]](/skyblueimage/27949.jpg)
소장정보
| 서가번호 | 등록번호 | 청구기호 | 소장처 | 대출가능여부 | 대출정보 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| EB00672 | EB : 520.7 해62ㅅ | 농림축산식품부 자료실 | 대출불가 |
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008110428s2003 ick HF a korIB
056 ▼a520.7▼24
090 ▼a520.7▼b해62ㅅ
110 ▼a해양수산부
24500▼a서해 특산 다모류로부터 유용신물질의 특성 및 응용성 연구▼d해양수산부▼e인하대학교 [공편]
260 ▼a[인천]▼b인하대학교▼c2003
300 ▼a64장 p.▼b삽도▼c전자파일
44000▼a최종연구보고서
50010▼a연구책임자 : 장정순
50010▼a원문파일(pdf)로만 열람가능
504 ▼a참고문헌 : p.61-63
7001 ▼a장정순
710 ▼a인하대학교
856 ▼uhttp://library.mafra.go.kr/skyblueimage/eb00672
9501 ▼a비매품
제1장 서론 ····· p. 1
제1절 연구 목적 및 내용 ····· p. 1
1. 연구 목적 ····· p. 1
제2절 연구의 착안점 ····· p. 1
제2장 국내외 기술개발 현황 ····· p. 2
제1절 국내외 현황 ····· p. 2
1. 국외의 현황 ····· p. 2
2. 국내의 현황 ····· p. 5
제2절 갯지렁이 및 공생미생물 유래의 단백질 분해효소의 산업적 이용성 ····· p. 6
제3절 여건변화와 전망 ····· p. 6
제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ····· p. 8
제1절 연구 개발 수행 내용 ····· p. 8
1. 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 8
1) Activity Assay ····· p. 8
2) Gene Screening And Characterization ····· p. 8
2-1. PCR And RT-PCR ····· p. 8
2-2. Plaque Hybridization ····· p. 9
2-2-1. Plating ····· p. 9
2-2-2. Filter Blotting 및 Probe DNA 제조 ····· p. 9
2-2-3. Hybridization & Autoradiography ····· p. 10
3) 갯지렁이 cDNA Library 재구축 ····· p. 10
3-1. Total RNA 및 Poly(A+) RNA 추출(이미지 참조) ····· p. 10
3-2. First & Second cDNA 합성 ····· p. 11
3-2-1. First Strand 합성 ····· p. 11
3-2-2. Second Strand 합성 ····· p. 11
3-3. Phage Vector의 Packaging 및 Library Amplification ····· p. 12
4) 항체를 이용한 갯지렁이 Serine Protease의 검색 ····· p. 12
5) Gene Characterization ····· p. 13
5-1. DNA Sequencing And Restriction Mapping ····· p. 13
5-2. Southern Blot Analysis ····· p. 13
5-3. Northen Blot Analysis ····· p. 13
6) Genomic DNA Library 구축 및 검색 ····· p. 14
6-1. Genomic DNA 추출 ····· p. 14
6-2. 제한효소 처리 및 Size Fractionation ····· p. 14
6-3. Packaging & Amplification ····· p. 15
6-4. Plaque Hybridization ····· p. 15
6-4-1. Plating ····· p. 15
6-4-2. Filter Blotting 및 Probe DNA 제조 ····· p. 15
6-4-3. Hybridization ····· p. 16
6-4-4. PCR에 의한 유전자 증폭 및 확인 ····· p. 16
6-4-5. Genomic DNA 분석 ····· p. 16
7) Expression Of The Serine Protease Gene In E. Coli ····· p. 17
7-1. 발현 Vector로 클로닝 ····· p. 17
7-2. 재조합 단백질 유도 및 Page 분석 ····· p. 18
7-3. 단백질 분석(Western Blot Analysis) ····· p. 18
7-4. Expression Optimization ····· p. 18
2. 공생 미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 18
1) Activity Assay ····· p. 18
2) 발효에 의한 Bacterial Protease 의 생산 ····· p. 19
3) Bacterial 단백질 분해효소의 Gene Cloning ····· p. 19
3-1. Gene Cloning ····· p. 19
3-2. Expression ····· p. 20
제2절 지금까지의 연구결과 ····· p. 21
1. 당해 연도 종합 ····· p. 21
1) 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 21
2) 공생 미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 21
2. 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 21
1) RT-PCR에 의한 Serine Protease 유전자 검색 ····· p. 21
1-1. Oligonucleotide Design For New Conserved Region ····· p. 21
1-2. RT-PCR ····· p. 23
1-3. Total cDNA를 주형으로 이용한 PCR ····· p. 26
2) 염기서열분석 및 Blast Search ····· p. 26
3) Screening Of The Full-Length Serineprotease Cdna Using Partial Probe DNA From Cdna Library Of Periserrula Leucophryna ····· p. 28
3-1. Primary Screening By Plaque Hybridization ····· p. 28
3-1-1. Filter Blotting 및 Probe DNA 제조 ····· p. 28
3-1-2. Hybridization & Autoradiography ····· p. 29
3-2. Secondary Screening By Plaque Hybridization ····· p. 30
3-2-1. Plating, Hybridization, & Autoradiography ····· p. 30
3-2-2. In Vivo Excision ····· p. 31
4) 염기서열분석 및 Blast Search ····· p. 32
5) 재조합 단백질 유도 및 Page 분석 ····· p. 35
3. 공생미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 36
1) Lab Scale Fermentation ····· p. 36
2) Large Scale Fermentation ····· p. 37
3) 단백질 분해효소 회수 공정 ····· p. 38
4) 공생미생물 유래 단백질 분해효소의 안정성 비교 분석 ····· p. 40
5) 세척력 ····· p. 41
6) 대두박 분해능 ····· p. 45
7) Capsulation ····· p. 48
8) 단백질 분해효소를 분비하는 미생물의 Screening ····· p. 49
9) 공생미생물 유래 단백질 분해효소의 Overexpression ····· p. 50
4. 항후 계획 ····· p. 51
1) 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 51
2) 미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 51
제4장 연구개발 목표 달성도 및 대외 기여도 ····· p. 52
제1절 연구 개발 목표 달성도 ····· p. 52
제2절 대외 기여도 ····· p. 53
1. 기술적 측면 ····· p. 53
2. 경제ㆍ산업적 측면 ····· p. 54
3. 사회ㆍ문화적 측면 ····· p. 58
제5장 연구개발 결과의 활용계획 ····· p. 59
제6장 참고 문헌 ····· p. 61
주의 ····· p. 64
제1절 연구 목적 및 내용 ····· p. 1
1. 연구 목적 ····· p. 1
제2절 연구의 착안점 ····· p. 1
제2장 국내외 기술개발 현황 ····· p. 2
제1절 국내외 현황 ····· p. 2
1. 국외의 현황 ····· p. 2
2. 국내의 현황 ····· p. 5
제2절 갯지렁이 및 공생미생물 유래의 단백질 분해효소의 산업적 이용성 ····· p. 6
제3절 여건변화와 전망 ····· p. 6
제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ····· p. 8
제1절 연구 개발 수행 내용 ····· p. 8
1. 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 8
1) Activity Assay ····· p. 8
2) Gene Screening And Characterization ····· p. 8
2-1. PCR And RT-PCR ····· p. 8
2-2. Plaque Hybridization ····· p. 9
2-2-1. Plating ····· p. 9
2-2-2. Filter Blotting 및 Probe DNA 제조 ····· p. 9
2-2-3. Hybridization & Autoradiography ····· p. 10
3) 갯지렁이 cDNA Library 재구축 ····· p. 10
3-1. Total RNA 및 Poly(A+) RNA 추출(이미지 참조) ····· p. 10
3-2. First & Second cDNA 합성 ····· p. 11
3-2-1. First Strand 합성 ····· p. 11
3-2-2. Second Strand 합성 ····· p. 11
3-3. Phage Vector의 Packaging 및 Library Amplification ····· p. 12
4) 항체를 이용한 갯지렁이 Serine Protease의 검색 ····· p. 12
5) Gene Characterization ····· p. 13
5-1. DNA Sequencing And Restriction Mapping ····· p. 13
5-2. Southern Blot Analysis ····· p. 13
5-3. Northen Blot Analysis ····· p. 13
6) Genomic DNA Library 구축 및 검색 ····· p. 14
6-1. Genomic DNA 추출 ····· p. 14
6-2. 제한효소 처리 및 Size Fractionation ····· p. 14
6-3. Packaging & Amplification ····· p. 15
6-4. Plaque Hybridization ····· p. 15
6-4-1. Plating ····· p. 15
6-4-2. Filter Blotting 및 Probe DNA 제조 ····· p. 15
6-4-3. Hybridization ····· p. 16
6-4-4. PCR에 의한 유전자 증폭 및 확인 ····· p. 16
6-4-5. Genomic DNA 분석 ····· p. 16
7) Expression Of The Serine Protease Gene In E. Coli ····· p. 17
7-1. 발현 Vector로 클로닝 ····· p. 17
7-2. 재조합 단백질 유도 및 Page 분석 ····· p. 18
7-3. 단백질 분석(Western Blot Analysis) ····· p. 18
7-4. Expression Optimization ····· p. 18
2. 공생 미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 18
1) Activity Assay ····· p. 18
2) 발효에 의한 Bacterial Protease 의 생산 ····· p. 19
3) Bacterial 단백질 분해효소의 Gene Cloning ····· p. 19
3-1. Gene Cloning ····· p. 19
3-2. Expression ····· p. 20
제2절 지금까지의 연구결과 ····· p. 21
1. 당해 연도 종합 ····· p. 21
1) 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 21
2) 공생 미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 21
2. 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 21
1) RT-PCR에 의한 Serine Protease 유전자 검색 ····· p. 21
1-1. Oligonucleotide Design For New Conserved Region ····· p. 21
1-2. RT-PCR ····· p. 23
1-3. Total cDNA를 주형으로 이용한 PCR ····· p. 26
2) 염기서열분석 및 Blast Search ····· p. 26
3) Screening Of The Full-Length Serineprotease Cdna Using Partial Probe DNA From Cdna Library Of Periserrula Leucophryna ····· p. 28
3-1. Primary Screening By Plaque Hybridization ····· p. 28
3-1-1. Filter Blotting 및 Probe DNA 제조 ····· p. 28
3-1-2. Hybridization & Autoradiography ····· p. 29
3-2. Secondary Screening By Plaque Hybridization ····· p. 30
3-2-1. Plating, Hybridization, & Autoradiography ····· p. 30
3-2-2. In Vivo Excision ····· p. 31
4) 염기서열분석 및 Blast Search ····· p. 32
5) 재조합 단백질 유도 및 Page 분석 ····· p. 35
3. 공생미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 36
1) Lab Scale Fermentation ····· p. 36
2) Large Scale Fermentation ····· p. 37
3) 단백질 분해효소 회수 공정 ····· p. 38
4) 공생미생물 유래 단백질 분해효소의 안정성 비교 분석 ····· p. 40
5) 세척력 ····· p. 41
6) 대두박 분해능 ····· p. 45
7) Capsulation ····· p. 48
8) 단백질 분해효소를 분비하는 미생물의 Screening ····· p. 49
9) 공생미생물 유래 단백질 분해효소의 Overexpression ····· p. 50
4. 항후 계획 ····· p. 51
1) 갯지렁이 유래 단백질 분해효소 ····· p. 51
2) 미생물 유래 단백질 분해효소 ····· p. 51
제4장 연구개발 목표 달성도 및 대외 기여도 ····· p. 52
제1절 연구 개발 목표 달성도 ····· p. 52
제2절 대외 기여도 ····· p. 53
1. 기술적 측면 ····· p. 53
2. 경제ㆍ산업적 측면 ····· p. 54
3. 사회ㆍ문화적 측면 ····· p. 58
제5장 연구개발 결과의 활용계획 ····· p. 59
제6장 참고 문헌 ····· p. 61
주의 ····· p. 64
