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서명 : 포플러의 유전공학 Ⅰ. 서론 = 1 1. 식물유전공학의 역사 = 2 2. 유전공학 재료로서의 포플러 = 4 Ⅱ. 유전자 클로닝 및 조작 = 6 1. 대장균의 유전공학 = 6 1) 대장균의 배양 유지 = 6 2) 박테리아의 생장 = 7 3) 박테리아 배양 배지조제 = 10 4) 플라스미드 벡터 = 12 5) 플라스미드 불화합성 = 13 6) Plasmid DNA 추출 = 14 7) 대장균의 chromosome DNA 추출 = 20 8) DNA의 정제 = 22 9) DNA 순도 검정 = 26 10) Restriction digestion = 28 11) 제한효소를 이용한 mapping과 cloning = 30 12) 전기영동 = 43 13) DNA elution = 45 14) 탈인산화 = 47 15) Ligation = 49 16) Competent bacteria 조제 = 50 17) 대장균 형질전환 및 선발 = 52 18) LacZ 유전자를 이용한 선발 = 54 19) Colony hybridization = 57 2. PCR = 59 1) PCR primer design 및 반응 최적화 = 59 2) 응용 PCR = 63 3) PCR 산물의 Cloning = 64 4) PCR의 각 구성 요소에 대한 환산 및 계산방법 = 64 3. Agrobacteria의 유전공학 = 67 1) Ti plasmid = 67 2) T-DNA = 69 3) T-DNA 밖의 유전자들 = 70 4) 염색체상의 vir 유전자들(chv) = 71 5) Disarmed vector = 71 6) Binary vector = 71 7) PCR cloning에 의한 T-DNA 벡터 제조 = 73 8) 엽록체 targetting = 76 9) multigene vector 제조 = 78 10) Agrobacterium의 competent cell 조제 = 80 11) 아그로박테리아 형질전환 = 82 12) 형질전환된 Agrobacteria의 검정 = 84 4. 포플러 형질전환 = 85 1) 아그로박테리아를 이용한 형질전환 = 85 2) Particle bombardment를 이용한 형질전환 = 87 5. 포플러의 배양 = 93 1) 야외재료의 시험관 정착 = 96 2) 다경줄기 유도에 의한 대량증식 = 98 3) 뿌리유도 = 100 4) 캘러스 유도 및 캘러스에서 줄기유도 = 101 5) 세포현탁배양 = 103 6) 원형질체 분리 및 배양 = 107 7) Pot묘 육성 = 111 8) 포지식재 = 112 9) 수경재배 = 113 6. 형질전환체 분석 = 115 1) 식물체 DNA 분리 = 115 2) Southern hybridization = 120 3) Single-step 방법에 의한 RNA 분리 = 127 4) Northern blot Hybridization = 132 5) Magnet Pack을 이용한 mRNA 정제 = 136 6) RT-PCR = 139 7. cDNA library = 141 1) cDNA library 합성 = 141 2) Spin column 준비 = 143 3) Packing = 144 4) LB 배지에 Packaged Phage의 Titration = 144 5) Lambda 배양을 위한 E. coli host 세포 배양 = 145 8. 포플러의 genome 분석 = 147 1) 엽록체 분리 = 147 2) 엽록체 DNA 분리 = 150 3) 엽록체 DNA의 RFLP = 152 4) PCR-RFLP = 153 9. Miscellaneous tests = 155 1) 폴리아민 분석 = 155 2) MTT를 이용한 미토콘드리아의 활력 조사 = 158 3) Evans blue를 이용한 세포막의 안정성 조사 = 160 10. Ti plasmid의 T-DNA sequence = 162 11. binary vector pBI101의 sequence = 190 12. 참고문헌 = 195 13. 용어해설 = 199 14. 색인 = 215 |
