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서명 : 인간의 당화시스템을 가진 형질전환누에로부터 재조합 인간 적혈구조혈인자(EPO)의 생산 및 효능연구 제1장 개요 = 20 제1절 연구개발의 목적 및 필요성 = 20 제2절 연구개발의 범위 및 내용 = 24 1. 형질전환 벡터시스템 개발 및 형질전환체 작성 = 24 2. 재조합 인간 적혈구 조혈인자(EPO)의 당화(glycosylation) 특성 및 효능 분석 = 25 3. 형질전환 누에로부터 재조합 인간 적혈구 조혈인자(EPO)의 분리·정제법 확립 = 26 제2장 연구개발수행 내용 및 결과 = 27 제1절 누에 형질전환 벡터시스템 확립 = 27 1. 누에에서 고효율 발현을 위한 promoter 선별 = 27 2. 형질전환 누에를 선별하기 위한 selection marker 유전자의 클로닝 = 29 3. 인간 적혈구 조혈인자(EPO) 유전자의 클로닝 = 31 4. 인간과 곤충의 당화(glycosylation)과정에서 차이를 보이는 효소들의 유전자 클로닝 = 31 5. 누에 형질전환벡터 제작 = 36 6. 새로운 벡터 시스템 제작 = 54 7. Fibroin heavy chain promoter를 이용한 인간 적혈구조혈인자(EPO) 발현벡터 제작 = 64 8. Fusion promoter 개발 = 66 제2절 누에 형질전환체 제작 및 형질전환체 검증, 선별 = 99 1. 인간 적혈구조혈인자(EPO)와 인간 당화(glycosylation) 관련 발현벡터의 미세주입 = 99 2. 인간 적혈구조혈인자(EPO)와 인간 당화(glycosylation) 관련 새로운 발현벡터의 발현효율 제고 = 111 3. 인간 적혈구조혈인자(EPO)와 인간 당화(glycosylation) 관련 발현벡터의 미세주입 = 112 제3절 누에 형질전환체로부터 재조합 인간적혈구조혈인자(EPO)의 분리 정제법 확립 = 119 1. 형질 전환된 누에의 고치와 견사선으로부터 추출한 인간 적혈구 조혈인자 정량, 정성분석을 위한 ELISA와 Western blot 시스템 구축 = 119 2. 고치와 견사선으로부터 재조합 인간 적혈구 조혈인자(EPO)를 포함하는 추출물의 확보를 위한 추출법 확립 = 126 3. 형질 전환된 누에의 고치와 견사선으로부터 Trition X-100이 포함된 buffer를 사용하여 추출한 인간 적혈구 조혈인자 정량, 정성 분석을 위한 ELISA와 Western blot 시스템 구축 = 134 4. 형질 전환된 누에의 고치와 견사선으로부터 재조합 인간 적혈구 조혈인자(EPO)의 분리 시도 = 139 5. 형질 전환된 누에의 고치와 견사선으로부터 당화관련 효소의 활성분석 = 145 제4절 재조합 인간적혈구조혈인자(EPO)의 효능시험법 확립 및 = 154 1. 재조합 인간적혈구조혈인자(EPO)의 효능시험법 확립 = 154 2. Mouse를 이용한 재조합 인간적혈구조혈인자(EPO)의 활성측정시험법 확립 = 156 3. SD Rat를 이용한 재조합 인간적혈구조혈인자(EPO)의 활성측정시험법 확립 = 164 4. Cisplatin 투여로 빈혈 유도된 Sprague-Dawley 랫드를 이용한 Recombinant Human Erythropoietin(rh-EPO)효력시험 = 184 제3장 형질전환 누에를 이용한 산업화 연구 = 203 1. in vivo electroporation 방법을 이용한 누에 형질전환체 작성방법 개발 = 203 2. Irido virus capsid 단백질을 발현하는 형질전환 누에를 이용한 어류 경구백신의 개발 = 212 3. 능성어 양식에서 사료첨가제로 사용하기 위한 능성어 성장호르몬을 발현하는 형질전환 누에의 개발 = 228 4. 화장품 원료로 사용하기 위한 형질전환누에로부터 재조합 인간 EGF 생산 = 236 제4장 고찰 = 239 |
