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서명 : 재조합 대장균으로부터 세로토닌유도체 생산과 기능성 화장품 소재개발 및 제품화 제1장 연구개발과제의 개요 = 1 제1절 연구개발의 목적 및 필요성 = 1 제2절 연구개발 범위 = 5 제2장 국내외 기술개발 현황 = 7 제1절 본 연구진의 선행연구결과 = 7 제2절 국내·외 타 연구기관의 연구내용 및 결과 = 11 제3장 연군개발수행 내용 및 결과 = 14 제1절 재조합 대장균을 이용한 새로토닌유도체 대량생산 연구 = 14 1. 서설 = 14 2. 연구 수행 방법 = 15 가. 4CL2와 SHT 유전자가 발현된 재조합 대장균 제작 = 15 나. 재조합 E. coli 에서 serotonin 유도체 정량 = 16 다. Western blotting과 SHT 효소 활성 측정 = 16 라. 4CL2와 SHT 유전자가 발현된 재조합 대장균 제작 = 17 마. 4CL2와 SHT 유전자의 peroplasm 발현 = 17 바. PelB-SHT 및 PelB-4CL2 동시발현 벡터 구조물 제작 = 17 사. 재조합 E. coli에서 PAs 정량 = 18 아. 벡터 제작 및 대장균에서 THT와 4CL 발현 = 18 자. 벼 4CL2와 SHT 유전자가 발현된 재조합 대장균 제작 = 19 차. 대장균에서 TDC와 T5H 유전자 공동발현을 통한 세로토닌 생산 = 19 카. 트립토판 처리에 따른 serotonin 생성물 측정 방법 = 20 3. 연구 수행 결과 = 20 가. 애기장대 4CL2(At4CL2) 와 SHT 동시발현 재조합 대장균의 세로토닌 유도체 생산 = 20 나. SHT와 4CL2의 periplasm 발현 및 SHT+4CL2 동시발현 = 25 다. THT와 4CL2의 동시발현 대장균 발현 및 세로토닌유도체 생합성 = 27 라. TDC와 T5H의 동시발현 대장균 발현 및 세로토닌 생합성 = 31 제2절 세로토닌 유도체의 항염증성 피부질환 개선제로서의 효능 분석 = 38 1. 서설 = 38 2. 연구 수행 방법 = 39 가. 세포배양 = 39 나. 세포생장분석 = 40 다. 세포내 ROS(Reactive Oxygen Species) 생성 측정 = 40 라. 지질과산화 분석 = 40 마. RNA 발현 분석 = 40 바. 단밸질 발현 분석 = 41 사. 항산화 물질이 피부세포에서 단백질의 carbonylation에 미치는 영향 = 41 아. 산화적 스트레스에 의한 H2AX 단백 인산화에 미치는 영향 = 41 자. 산화적 스트레스로 인한 세포 내 단백 인산화 분석 = 42 차. Invasion assay = 42 카. Migration assay = 42 타. 세포주기 FACS 분석 = 42 3. 연구 수행 결과 = 42 가. 세로토닌 전구체가 사람 피부세포 생장에 미치는 영향 분석 = 43 나. 산화적 스트레스로부터 피부세포 보호하는 항산화 활성 분석 = 43 다. 세포내 유해산소(ROS) 생성 억제 활성 분석 = 43 라. 지질과산화 억제 활성 분석 = 44 마. CaS 의 세포 생장 촉진 활성 분석 = 45 바. 세로토닌 전구체의 산화적 스트레스로 인한 DNA 손상 방어 활성 분석 = 46 사. 산화적 스트레스로 인한 단백질 carbonylation 분석 및 세로토닌 유도체의 활성 분석 = 46 아. 산화적 스트레스에 의한 세포내 단백 인산화 분석 = 47 자. 과산화수소에 의한 피부세포 독성 분석 = 48 차. CaS의 항염증 효능 분석 = 49 카. Integrin 유전자 발현 영향 분석 = 50 제3절 세로토닌유도체를 이용한 기능성 화장품 소재 및 제품개발 = 52 1. 서설 = 52 2. 연구 수행 방법 = 52 가. 세포배양 = 52 나. Melanin conttent assay = 53 다. NF-kB activity assay = 53 라. Collagen synthesis assay = 53 마. Collagenase activity inhibition assay = 54 바. 지방전구세포 3T3L1 분화 = 54 사. TGF-beta 생산 assay = 55 아. Fibronectin 발현 = 55 자. 피부일차자극시험 = 55 차. 세로토닌 유도체의 pH, 열 안정성 시험 = 55 카. 분광광도계에 따른 성상 관찰 = 56 타. 세로토닌 유도체의 리포좀 원료 피부투과시험 = 56 3. 연구 수행 결과 = 57 가. 세로토닌 유도체가 B16 melanoma 세포의 멜라닌 생성에 미치는 영향 분석 = 57 나. 세로토닌 유도체가 NIH 3T3의 NF-kB의 활성에 미치는 영향 분석 = 57 다. 세로토닌 유도체가 인체유래 섬유아세포 콜라겐 생성에 미치는 영향 분석 = 58 라. 세로토닌 전구체가 인체유래 섬유아세포의 콜라게네이즈 MMP-1 활성에 미치는 영향 분석 = 59 마. 세로토닌 전구체가 3T3L1 지방전구세포 분화에 미치는 영향 분석 = 59 바. 세로토닌 전구체가 3T3L1 전구지방세포 TG 생산에 미치는 영향 분석 = 60 사. 유효물질의 작용 기전 규명(켈로이드억제관련) = 60 아. 세로토닌 유도체의 물리, 화학적 특성 규명 = 62 자. 세로토닌 유도체의 인체사용에 따른 안전성 시험 = 65 차. 유효물질에 대한 원료화 및 CTFA 등재 = 65 카. 세로토닌과 쿠마로일세로토닌 전구체가 3T3L1 지방전구세포 분화에 미치는 영향 비교 = 68 타. 원료 제형연구 (피부투과도 및 안정성 향상) = 70 파. 시제품 개발 = 72 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 = 73 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 = 76 제1절 연구 성과 = 76 제2절 타 연구에의 응용 = 78 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 = 80 제7장 참고문헌 = 82 |
