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서명 : 해조류로부터의 생리활성물질을 이용한 기능성 식품소재 개발 제1장 서론 = 1 제1절 연구개발의 목적과 범위 = 1 제2절 기술적인 측면에서의 연구개발 필요성 = 1 제3절 경제 · 산업적 측면에서의 필요성 = 5 제4절 사회 · 문화적 측면에서의 필요성 = 6 제2장 해조류 함유 macrophage 활성화 물질의 기능성식품 소재화 = 8 제1절 서설 = 8 제1항 재료 = 12 제2항 실험방법 = 12 1. Macrophage 활성화 물질의 검색 시료 제조 = 12 2. 돌김으로부터 Macrophage 활성화 물질의 추출 및 정제 = 13 3. Macrophage 활성화 물질의 특성 = 16 4. 구성당 분석 = 17 5. Macrophage 활성화 물질의 항종양 활성 측정 = 17 6. In vitro 상에서의 면역활성 측정 = 19 7. 돌김 함유 macrophage 활성화 물질의 공업적 추출방법 = 20 8. 돌김 함유 macrophage 활성화 물질의 공업적 수준에서의 분리 및 정제 = 20 9. 경질캡슐제 제작 및 안정성 검사 = 21 제3절 결과 = 21 제1항 해조류로부터 macrophage 활성화 물질의 검색 = 21 제2항 돌김으로부터 macrophage 활성화 물질의 추출 = 25 1. 추출 용매의 영향 = 25 2. 돌김으로부터 macrophage 활성화 물질의 대량 추출 = 27 제3항 Macrophage 활성화 물질 본체의 검토 = 27 제4항 Macrophage 활성화 다당의 정제 = 28 1. Ion exchange chromatography에 의한 분획 = 28 2. Gel permeation chromatography(GPC)에 의한 분획 = 31 3. 정제 다당의 순도 확인 = 31 4. 정제 다당의 분자량 확인 = 34 제5항 Macrophage 활성화 물질 PS-Ⅰ의 항종양 활성 = 34 1. Sarcoma-180 cell에 대한 PS-Ⅰ의 항종양 활성 = 34 2. Sarcoma-180 cel에 대한 직접적 세포독성 = 36 3. 마우스 대식세포 활성화에 미치는 PS-Ⅰ의 영향 = 37 4. 마우스 B 임파구 활성화에 미치는 PS-Ⅰ의 영향 = 38 제6항 In vitro 상에서의 면역활성 = 39 1. TNF-α(tumor necrosis factor-α) bioassay = 39 2. NO(nitric oxide)determination = 40 3. Phagocytosis assay = 41 제7항 돌김 함유 macrophage 활성화 물질의 기능성 식품화 = 43 1. 공업적 추출방법의 확립 = 43 2. 시작품 제작 및 안정성 검사 = 47 제3장 해조류 함유 항보체 활성물질의 기능성 식품 소재화 = 49 제1절 서설 = 49 제2절 재료 및 방법 = 51 제1항 재료 = 51 제2항 실험방법 = 51 1. 일반 성분분석 및 황산기 함량 분석 = 51 2. 구성당 분석 = 52 3. 항보체 활성 측정 = 52 4. 해조류부터 항보체 활성 검색 = 54 5. 항보체 물질의 추출 = 54 6. 참도박으로부터 항보체 활성물질의 추출 = 54 7. 참도박 열수 추출물로부터 항보체 활성물질의 정제 = 56 8. 정제다당류의 순도 및 HPLC분자량 측정 = 58 9. 항보체 활성 본체의 규명 = 58 10. 보체계 활성경로 및 용혈억제 양식 검토 = 58 11. 참도박 열수 추출물의 독성 실험 = 59 12. Sarcoma-180의 고형암 증식 저해실험 = 59 13. 면역기전에 관련된 장기 중량 변화 = 60 14. Sarcoma-180 cell에 대한 세포독성 측정 = 60 15. 참도박 함유 항보체 활성물질의 공업적 추출방법 = 61 16. 참도박 함유 항보체 활성물질의 공업적 수준에서의 분리 및 정제 = 61 17. 경질캡슐제 제작 및 안정성 검사 = 62 제3절 결과 = 62 제1항 해조류로부터 항보체 활성물질의 검색 = 62 제2항 참도박(Pachymeniopsis elliptica)으로부터 항보체 활성 물질의 추출 = 66 1. 추출 용매의 영향 = 66 2. 추출방법에 따른 다당류 항보체 활성 검색 = 68 제3항 참도박 열수 추출물의 항보체 활성과 구성성분 = 70 제4항 항보체 활성 다당의 정제 = 71 1. PE-1의 한외여과에 의한 분획 = 71 2. PE-1-C의 ion exchange chromatography에 의한 분획 = 73 3. PE-1-CIV의 Sepharose CL-6B에 의한 분획 = 74 4. PE-1-CIV-ii의 HPLC에 의한 순도 확인 = 74 제5항 항보체 활성의 본체 = 77 제6항 보체계 활성경로 및 용혈억제 양식의 검토 = 78 제7항 참도박 열수 추출물의 독성검사 = 79 1. 경구투여 급성독성 검사 = 79 2. 꼬리정맥투여 급성독성 검사 = 79 제8항 항보체 활성 물질의 마우스 꼬리정맥 주사시 장기무게변화 = 81 제9항 항보체 활성 물질의 고형암 중식저해 효과 = 83 제10항 항보체 활성 물질의 면역기전에 관련된 장기 중량변화 = 84 제11항 Sarcoma-180 cell에 대한 세포독성 측정 = 86 제12항 참도박 함유 항보체 활성 물질의 기능성 식품화 = 86 1. 공업적 추출방법의 확립 = 86 2. 시작품 제작 및 안정성 검사 = 90 제4장 해조류 함유 혈압조절 활성 물질의 기능성식품 소재화 = 91 제1절 서설 = 91 제2절 재료 및 방법 = 96 제1항 재료 = 96 제2항 실험방법 = 97 1. 일반 성분 분석 및 황산기 함량 분석 = 97 2. 구성당 분석 = 97 3. 항응고 활성 측정 = 98 4. 해조류로부터 항응고 활성 검색 = 98 5. 참도박(Pachymeniopsis elliptica)으로부터 항응고 물질의 추출조건 검토 = 98 가. 추출용매에 따른 항응고 활성 검토 = 98 나. 추출온도에 따른 항응고 활성 검토 = 98 다. 추출시간에 따른 항응고 활성 검토 = 100 6. 참도박으로부터 항응고 활성 물질의 추출 = 100 7. 참도박 열수 추출물로부터 항응고 활성 물질의 정제 = 100 가. 한외여과에 의한 분획 = 100 나. DEAE-Toyopearl 650C에 의한 ion exchange chromatography = 100 다. Sepharose CL-6B에 의한 gEl filtration chromatography = 100 8. 정제다당류의 순도 및 HPLC 분자량 측정 = 102 9. 적외선 흡수분광법(Infra-red spectroscopy) = 103 10. 참도박 열수 추출물의 in vivo 상에서의 항응고 활성 = 103 가. 급성독성(acute toxicity) 검사 = 103 나. 아만성 독성(subchronic toxicity) 실험 = 103 다. Thrombin에 대한 항치사성 효과 = 104 라. 생체 내에서의 항응고 효과 = 104 마. 생체 내에서의 잔존 효과 = 104 11. ACE 저해물질의 추출조건 검토 = 104 가. 산ㆍ알칼리 가수분해 = 104 나. 시간에 따른 산ㆍ알칼리 가수분해 = 105 다. 농도에 따른 산 가수분해 = 105 12. ACE 저해효과 측정 = 105 13. 단백질 정량 = 105 14. 김으로부터의 ACE 활성 저해물질의 분리 = 105 15. ACE 저해물질의 정제 = 106 가. Amberlite XAD 8 column에 의한 affinity chromatography = 106 나. DEAE-Toyopearl 650C column에 의한 ion exchange chromatography = 106 다. Sephadex LH-20 column에 의한 size exclusion chromatography = 106 라. Reverse phase HPLC에 의한 분리 = 106 마. High Performance Capillary Electrophoresis(HPCE) = 106 16. Protease처리에 대한 영향 = 108 17. 활성물질의 특성 = 108 가. 분자량 확인 = 108 나. ACE에 대한 저해 양상 = 108 다. 아미노산 분석 = 108 18. 본태성고혈압쥐에서의 혈압강하효과 = 109 가. 장내 소화효소에 대한 영향 = 109 나. Single oral administration = 110 다. Daily oral administration = 110 19. ACE activities of organs in SHR's = 110 가. Daily oral administration = 110 나. Serum에서의 ACE 추출 = 110 다. 각 조직에서의 ACE 추출 = 110 라. 각 조직에서 추출한 ACE 활성 측정 = 111 20. Hep-G2 cell에서의 항콜레스테롤 효과 = 111 가. Cell cultures = 111 나. Hep-G2 cell에서의 지질 추출 = 112 다. 트리글리세라이드 측정 = 112 라. 콜레스테롤 측정 = 112 21. 김 함유 ACE 활성 저해성분의 공업적 추출방법 = 113 22. 김 함유 ACE 활성 저해물질의 공업적 수준에서의 분리 및 정제 = 113 가. 탈색방법 = 113 나. 한외여과를 이용한 공업적 수준에서의 정제법 확립 = 113 다. 김 함유 ACE 활성 저해물질의 공업적 순도에서의 조제 = 113 23. 경질캡술제 제작 및 안정성 검사 = 113 제3절 결과 = 14 제1항 해조류로부터 항응고 활성물질의 검색 = 114 제2항 참도박(Pachymeniopsis elliptica)으로부터 항응고 활성 물질의 추출 = 117 1. 추출용매에 따른 항응고 활성 검색 = 117 2. 추출온도에 따른 항응고 활성 검색 = 118 3. 추출시간에 따른 항응고 활성 검색 = 119 4. 참도박으로부터 항응고성 물질의 대량추출과 에탄올 농도별 침전 = 120 제3항 참도박(Pachymeniopsis elliptica)으로부터 항응고 활성 물질의 분리 및 정제 = 122 1. PE-2의 ultrafiltration 분획에 의한 항응고 활성 = 122 2. PE-2-IV의 ion exchange chromatography에 의한 분획 = 123 3. PE-2-IVC의 Sepharose CL-6B에 의한 분획 = 124 4. PE-2-IVC-ii의 HPLC에 의한 분획1 = 124 제4항 정제 항응고 활성 다당의 순도 및 분자량 측정 = 129 1. 순도 확인 = 129 2. 정제 다당의 분자량 검토 = 130 3. 참도박으로부터 추출한 항응고성 물질의 특성 = 130 제5항 참도박에서 분리한 항응고성 다당류의 IR 흡수 특성 파악 = 131 제6항 참도박 PE-2의 mouse(in vivo)에서의 항응고 활성 = 133 1. 경구투여 급성 독성(acute toxicity) = 133 2. 꼬리정맥투여 급성 독성 = 133 3. 경구에 의한 아만성 독성(subchronic toxicity) = 134 4. Thrombin에 의한 항치사성 효과 = 135 5. 경구투여에 의한 생체 내에서의 항응고 효과 = 135 6. 꼬리정맥투여에 의한 생체 내에서의 항응고 효과 = 136 7. 생체내에서의 잔존효과 = 137 제7항 해조류로부터 ACE 저해활성 검색 = 138 제8항 산ㆍ알칼리 가수분해물의 ACE 저해활성 = 138 1. 산ㆍ알칼리 가수분해 = 138 2. 산ㆍ알칼리 가수분해에 대한 반응시간의 영향 = 138 3. 산 가수분해에 대한 농도의 영향 = 143 제9항 김 산가수분해물의 ACE 저해활성 = 143 제10항 ACE 활성 저해물질의 분리 및 정제 = 144 1. Amberlite XAD 8 column chromatography에 의한 분리 = 144 2. DEAE-Toyopearl 650C column chromatography에 의한 분리 = 145 3. Sephadex LH-20 column chromatography에 의한 분리 = 147 4. Analytical HPLC에 의한 분리 = 147 5. High Performance Capillary Electrophoresis (HPCE)에 의한 순도확인 = 147 제11항 ACE 활성 저해물질의 특성 = 150 1. 정제물질의 분자량 확인 = 150 2. ACE에 대한 저해 양상 = 150 3. 아미노산 분석 = 152 제12항 본태성 고혈압쥐로부터 혈압강하효과 = 152 1. 소화효소에 대한 영향 = 152 2. Single oral administration = 153 3. Daily oral administration = 154 4. ACE activity of the organs in SHR's = 154 제13항 ACE 저해제의 항콜레스테롤 효과 = 156 1. Cell viability = 156 2. ACE 저해제의 항콜레스테롤 효과 = 157 제14항 김 함유 ACE활성 저해물질의 기능성 식품화 = 158 1. 공업적 추출방법의 확립 = 158 2. 시작품 제작 및 안정성 검사 = 161 부록 = 162-1 1. 발표논문 = 162-1 2. 특허출원 = 182-1 |