목차정보
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서명 : 새송이버섯 유래 재조합 단백질을 이용한 기능성 식품 개발 제1장 연구개발과제의 개요 = 27 1절. 연구개발의 필요성 = 27 1. 연구개발대상 기술의 경제적 · 산업적 중요성 및 연구개발의 필요성 = 27 가. 재조합 유용단백질소재의 경제적 산업적 중요성 = 27 나. 버섯을 이용한 재조합 유용단백질 생산기술 개발의 필요성(그림2) = 29 2. 관련기술에 대한 연구팀의 선행연구결과 = 31 가. 새송이버섯을 이용한 GUS 유전자발현 연구 = 31 나. 항생제 marker를 이용한 형질전환버섯의 선별 = 32 다. 형질전환버섯의 형질전환 유무검증 = 32 라. 새송이 버섯에서 인체유래 단백질을 생산하기 위한 발현 백터의 구축 = 33 마. 새송이 버섯에서 인체유래 단백질의 발현 = 34 2절. 연구개발의 목표 및 내용 = 35 1. 연구개발의 최종목표 및 성격 = 35 가. 연구개발의 최종목표 = 35 나. 연구개발의 성격 = 35 2. 연차별 연구개발의 목표 및 내용 = 36 제2장 국내외 기술개발 현황 = 39 1절. 세계적 수준 = 39 2절. 국내수준 = 39 3절. 국내·외의 연구현황 = 40 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 = 41 1절. 연구범위 및 연구수행 방법 = 41 1. 1차년도(2008년) = 41 2. 2차년도(2009년) = 42 3. 3차년도(2010년) = 43 2절. 연구개발의 추진 전략·방법 및 추진체계 = 44 1. 연구개발의 추진 전략·방법 = 44 가. 제1세부과제 : 유용 재조합단백질 생산 시스템 개발 = 44 나. 제2세부과제 : 버섯 유용재조합 단백질 발현 시스템 개발 = 47 다. 제3세부과제 : 버섯 유용 재조합 단백질 자실체 및 균사체 대향 배양 시스템 개발 = 49 2. 연구개발의 추진체계 = 51 3절. 연구개발결과 = 52 1. 제1세부 과제 : 유용 재조합단백질 생산 시스템 개발(조선대학교) = 52 가. 성장 호르몬(Growht Hormone) = 52 나. 인터루킨32(Interleukin 32, IL-32) = 68 (1) Beta-glucuronidase(GUS) assay = 68 (2) 암 배양과 hygromycine(50 μg/ml) 함유 배지에서 수율 = 70 (3) 형질전환 균사체 Genomic DNA 분리 = 72 (4) 형질전환 균사체 확인 : Southern blot = 74 (5) SDS PAGE = 76 (6) 형질전환 균사체 protein level 발현확인 : Western blot = 78 (7) biological activity of IL-32 = 79 (가) MIP-2 = 79 (나) TNF-alpha = 79 다. hPDGF-BB = 82 (1) PCR = 82 (2) Sequencing = 84 (3) Agrobacterium 형질전환 PCR = 86 (4) 버섯 균사체 오염률과 발생률 = 88 (5) GUS 활성의 조직화학적 분석 = 90 (6) 형질전환 균사체의 유전자 도입 확인 = 92 (7) Total RNA 분리 및 cDNA 합성과 유전자 도입 확인 = 94 (8) 형질전환 균사체의 단백질 분리 및 분석 = 96 (가) 단백질 정량 = 96 (나) Western blot Purification 및 분석 = 97 (9) Fusion Protein Purification 및 분석 = 99 (10) MALDI-TOF mass spectrometry를 이용한 재조합 단백질의 질량분석 = 102 (11) 재조합 단백질의 Bioactivity assay = 104 (12) 형질전환 균사체에서 생산된 자실체의 분석 = 106 (가) PCR analysis = 107 (나) Southern blot analysis = 108 (다) Total RNA analysis = 110 (라) Western blot analysis = 111 라. Secretion signal(a-factor) = 112 2. 제1협동과제 : 버섯 유용재조합 단백질 발현 시스템 개발((주)캐러스) = 130 (1) 버섯 특이적 프로모터 Tag 및 형질전환체 선별 = 130 (2) 형질전환 버섯 게놈 DNA 추출 = 131 (3) TAIL PCR of promoter tag = 131 (4) TAIL PCR 개요 = 133 (5) TAIL PCR 장점 = 133 (6) TAIL PCR 중요한 특성 및 방법 = 133 (7) 특이 프로모터 단편 클로닝 = 136 (8) DNA 염기서열 분석 = 136 (9) 결과 = 136 (가) 버섯 promoter trap vector 제작 = 136 (나) Promoter trap 형질전환체 선별 = 137 (다) Strategies for isolating and cloning sequences flanking T-DNA = 138 (라) Analysis of 5'-end cloning sequences flanking T-DNA = 141 (10) α-factor vector construction = 141 3. 제2협동과제 : 버섯 유용 재조합 단백질 자실체 및 균사체 대량 배양 시스템 개발(전북대학교) = 146 가. 주요 연구내용 및 결과요약 = 146 (1) 서론 = 146 (2) 연구내용(재료 및 방법) = 147 (가) 공시 균주 = 147 (나) 액체 배지의 조제 = 148 (다) 고체 배지의 조제 = 154 (라) Chitin 함량분석 = 154 (마) Ergosterol 함량분석 = 154 (3) 결과 및 고찰 = 155 (가) 균사체 생산 최적배지 조성 = 155 (나) 곡물배지의 Chitin과 Ergosterol 정량에 의한 균체량 측정 = 157 (다) 균사체 및 자실체 건조 회수량 = 159 (4) 요약 = 167 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 = 169 1절. 연구개발목표의 달성도 및 관련분야의 기술발전에의 기여도 = 169 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 = 173 1절. 연구개발 성과 = 173 1. 학술발표 : 한국버섯학회 포스터 발표 = 173 2. 수상 : 한구버섯학회 포스터 발표 우수상 수상 = 175 3. 학술발표 : 일본분자생물학회 포스터 발표 = 176 4. 특허출원 = 178 5. 학위논문 = 190 6. 연구개발결과의 성과 및 활용목표 대비 실적 = 191 (1) 연구성과 목표 = 191 (2) 연구성과 활용 = 191 (3) 논문게재 성과 = 192 (4) 특허 성과 = 196 (5) 인력활용/양성 성과 = 196 (6) 경제사회 파급효과 = 196 7. 구매금액이 3천만원 이상인 기자재 구매현황 = 196 8. 연구비 집행실적 = 197 9. 중요 연구변경 사항 = 197 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 = 198 1절. 국내외 관련분야 환경변화 = 198 제7장 참고문헌 = 200 |