008030109s2002    ggk       d      a  korIA
 056  ▼a520.7▼24
 090  ▼a520.7▼b농239ㄱ
 110  ▼a농림부
 24500▼a고위험도 해외전염병 정밀진단법 개발 및 유효성 평가▼d농림부▼e국립수의과학검역원 [공편]
 260  ▼a[안양]▼b국립수의과학검역원▼c2002.
 300  ▼a153 p.▼b삽도▼c전자파일
 44000▼a최종연구보고서
 50010▼a원문파일(pdf)로만 열람가능
 50010▼a연구책임자 : 최강석
 504  ▼a참고문헌 수록
 653  ▼a해외전염병▼a정밀진단법
 7001 ▼a최강석
 710  ▼a국립수의과학검역원
 710  ▼a농수산부
 710  ▼a농림수산부
 710  ▼a농림수산식품부
 710  ▼a농림축산식품부
 856  ▼uhttp://library.mafra.go.kr/skyblueimage/eb03275
 9501 ▼a비매품

요약문 = 1

Ⅰ. 제목 = 1

Ⅱ. 연구목적 및 중요성 = 1

Ⅲ. 연구내용 및 결과 요약 = 2

Ⅳ. 수의과학검역원 단독수행시 미해결분야의 해결괸 기술요약 = 4

Ⅴ. 연구결과 활용 = 6

Ⅵ. 공동연구 상대국 수행기관 현황 = 9


요약문 = 11

목차 = 14


제1장  우역항체검출용 효소면역측정법 개발 = 17

 Ⅰ. 서언 = 17

 Ⅱ. 재료 및 방법 = 18

    1. 바이러스 및 혈청 = 18

    2. 단클론항체 생산 = 19

    3. Baculovirus에서의 full-length N단백질 발현 = 19

    4. 대장균에서의 truncated N mutants의 발현 = 20

    5. 우역바이러스 Ndb전자 염기서열 분석 = 22

    6. SDS-PAGE 및 Western blotting = 22

    7. Immunofluorescence assay = 23

    8. Biotinylated mAb를 이용한 competition binding assay = 23

    9. Indirect ELISA = 24

    10. Blockin ELISA = 24

    11. Competitive ELISA = 25

    12. 바이러스 중화시험 = 25

 Ⅲ. 결과 및 고찰 = 26

    1. 우역바이러스 단클론항체의 생산 = 26

    2. Baculovirus발현 N 단백질의 생산 = 31

    3. 우역바이러스 N단백질의 염기서열 분석 = 37

    4. Truncated N mutant를 이용한 epitope mapping = 40

    5. Recombinant N 단밸질을 이용한 우역 항체검출용 C-ELISA 개발 = 49

 Ⅳ. 종합결과 = 57

 Ⅴ. 적요 = 59

 Ⅵ. 적요 = 59

 Ⅶ. 참고문헌 = 59


제2장  구제역 진단제제 개발 = 65

 Ⅰ. 서언 = 65

 Ⅱ. 재료 및 방법 = 66

    1. 바이러스 및 혈청 = 66

    2. 단클론 항체 = 67

    3. RT-nested PCR = 67

    4. 구제역 3ABC단백질 발현 = 72

    5. NSP-ELISA = 73

    6. 간접형광항체법 = 74

 Ⅲ. 결과 및 고찰 = 75

    1. 구제역바이러스 VPI 유전자 분석 = 75

    2. 구제역 진단항원 및 항체생산 = 79

    3. RT-nested PCR을 이용한 구제역바이러스유전자검출을 위한 PCR primers 평가 = 81

    4. 구제역백신추출항원을 이용하여 생산한 단클론항체의 유효성평가 = 85

 Ⅳ. 종합결과 = 86

 Ⅴ. 적요 = 87

 Ⅵ. 참고문헌 = 88


제3장  우폐역 진단기법 및 진단제제 개발 = 91

 Ⅰ. 서언 = 91

 Ⅱ. 결과 = 92

    1. 우폐역 단클론 항체 생산 = 92

      1) 우폐역 면역항원 생산 = 92

      2) 단클론성 항체선발을 위한 CBPP ELISA = 92

      3) 우폐역 진단용 단크론성 항체 선발 = 93

    2. 국내개발 PCR 진단법에 의한 우폐역균 검출 = 93

    3. 프랑스 CIRAD-EMVT 개발 PCR법에 의한 우폐역균 검출 = 94

    4. 우폐역 항체검출을 위한 혈청검사기법 = 98

    5. 우폐역 백신 T1 또는 T1sr에 대한 품질관리검정 = 109

 Ⅲ. 종합 결과 = 114

 Ⅳ. 적요 = 114

 Ⅴ. 참고문헌 = 114


제4장  국내개발 해외전염병 진단제제 유효성 평가 = 116

 Ⅰ. 서언 = 116

 Ⅱ. 해외전염병 진단제제 유효성 평가 = 117

 Ⅱ-1. 돼지수포병 진단제제 (단클론항체) 유효성 평가 = 117

    1. 재료 및 방법 = 117

      1) 돼지수포병 바이러스 단클론 항체 = 117

      2) 유효성 평가에 사용된 돼지수포병바이러스 = 117

      3) 유효성 평가에 사용된 세포주 = 117

      4) 간접형광항체법 = 118

    2. 결과 및 고찰 = 121

 Ⅱ-2. 아프리카돼지콜레라 진단제제 (PCR primer 및 p12 antigen) 유효성 평가 = 123

    1. 재료 및 방법 = 123

      1) ASFV p12 항원 및 야외혈청 = 123

      2) 양성 및 음성 혈청 = 123

      3) 아프리카돼지콜레라바이러스 DNA 분리 = 123

      4) 아프리카돼지콜레라바이러스 유전자증폭 = 125

      5) Indirect ELISA = 127

    2. 결과 및 고찰 = 128

      1) PCR법에 의한 ASFV특이 유전자 검출 = 128

      2) 유전자재조합 ASFV p12 발현단백질 항원의 항원성 조사 = 129

 Ⅱ-3. 가성우역 진단제제 (mAb 및 synthetic peptides) 유효성 평가 = 132

    1. 재료 및 방법 = 132

      1) 합성펩타이드절편 = 132

      2) 우역 및 가성우역 혈청 = 132

      3) 가성우역 N단밸질특이 단클론항체 및 평가 N 단밸직 항원 = 133

      4) Peptide ELISA = 133

      5) Indirect ELISA = 135

      6) Competitive ELISA = 135

    2. 재료 및 고찰 = 135

      1) 합성펩타이드의 우역 및 가성우역항체와의 반응성 평가 = 135

      2) 국내작성 가성우역 단크ffhsgkdcp에 대한 반응성 평가 = 138

 Ⅱ-4. 가성우역과 우역 병인체 감별진단을 위한 RT-PCR 진단법 = 142

    1. 재료 및 방법 = 142

      1) PCR primer sets = 142

      2) 검사용 항원조직 샘플 = 142

      3) 감염조직으로부터 genomic RNA 추출 = 143

      4) cDNA 합성 = 143

    2. 결과 및 고찰 = 145

 Ⅱ-4. 소해면상뇌증 진단제제 (mAb 및 prion) 유효성 평가 = 146

    1. Prionics kit를 이용한 BSE prion 신속검출방법 = 146

    2. 국내개발 Prion 재조합단백질 및 Prionxmr이 단클론항체의 유효성 평가 = 148

      1) 시약 및 재료 = 148

      2) Prion 재조합 단밸질 및 Prion 특이 단클론 항체의 반응성 평가 = 148

      3) Prion 특이 단클론 항체의 prionrjacnf 민감도 평가 = 149

 Ⅲ. 종합결과 = 150

 Ⅳ. 적요 = 151

 Ⅴ. 참고문헌 = 151