목차정보
서명 : 고위험도 해외전염병 정밀진단법 개발 및 유효성 평가 요약문 = 1 Ⅰ. 제목 = 1 Ⅱ. 연구목적 및 중요성 = 1 Ⅲ. 연구내용 및 결과 요약 = 2 Ⅳ. 수의과학검역원 단독수행시 미해결분야의 해결괸 기술요약 = 4 Ⅴ. 연구결과 활용 = 6 Ⅵ. 공동연구 상대국 수행기관 현황 = 9 요약문 = 11 목차 = 14 제1장 우역항체검출용 효소면역측정법 개발 = 17 Ⅰ. 서언 = 17 Ⅱ. 재료 및 방법 = 18 1. 바이러스 및 혈청 = 18 2. 단클론항체 생산 = 19 3. Baculovirus에서의 full-length N단백질 발현 = 19 4. 대장균에서의 truncated N mutants의 발현 = 20 5. 우역바이러스 Ndb전자 염기서열 분석 = 22 6. SDS-PAGE 및 Western blotting = 22 7. Immunofluorescence assay = 23 8. Biotinylated mAb를 이용한 competition binding assay = 23 9. Indirect ELISA = 24 10. Blockin ELISA = 24 11. Competitive ELISA = 25 12. 바이러스 중화시험 = 25 Ⅲ. 결과 및 고찰 = 26 1. 우역바이러스 단클론항체의 생산 = 26 2. Baculovirus발현 N 단백질의 생산 = 31 3. 우역바이러스 N단백질의 염기서열 분석 = 37 4. Truncated N mutant를 이용한 epitope mapping = 40 5. Recombinant N 단밸질을 이용한 우역 항체검출용 C-ELISA 개발 = 49 Ⅳ. 종합결과 = 57 Ⅴ. 적요 = 59 Ⅵ. 적요 = 59 Ⅶ. 참고문헌 = 59 제2장 구제역 진단제제 개발 = 65 Ⅰ. 서언 = 65 Ⅱ. 재료 및 방법 = 66 1. 바이러스 및 혈청 = 66 2. 단클론 항체 = 67 3. RT-nested PCR = 67 4. 구제역 3ABC단백질 발현 = 72 5. NSP-ELISA = 73 6. 간접형광항체법 = 74 Ⅲ. 결과 및 고찰 = 75 1. 구제역바이러스 VPI 유전자 분석 = 75 2. 구제역 진단항원 및 항체생산 = 79 3. RT-nested PCR을 이용한 구제역바이러스유전자검출을 위한 PCR primers 평가 = 81 4. 구제역백신추출항원을 이용하여 생산한 단클론항체의 유효성평가 = 85 Ⅳ. 종합결과 = 86 Ⅴ. 적요 = 87 Ⅵ. 참고문헌 = 88 제3장 우폐역 진단기법 및 진단제제 개발 = 91 Ⅰ. 서언 = 91 Ⅱ. 결과 = 92 1. 우폐역 단클론 항체 생산 = 92 1) 우폐역 면역항원 생산 = 92 2) 단클론성 항체선발을 위한 CBPP ELISA = 92 3) 우폐역 진단용 단크론성 항체 선발 = 93 2. 국내개발 PCR 진단법에 의한 우폐역균 검출 = 93 3. 프랑스 CIRAD-EMVT 개발 PCR법에 의한 우폐역균 검출 = 94 4. 우폐역 항체검출을 위한 혈청검사기법 = 98 5. 우폐역 백신 T1 또는 T1sr에 대한 품질관리검정 = 109 Ⅲ. 종합 결과 = 114 Ⅳ. 적요 = 114 Ⅴ. 참고문헌 = 114 제4장 국내개발 해외전염병 진단제제 유효성 평가 = 116 Ⅰ. 서언 = 116 Ⅱ. 해외전염병 진단제제 유효성 평가 = 117 Ⅱ-1. 돼지수포병 진단제제 (단클론항체) 유효성 평가 = 117 1. 재료 및 방법 = 117 1) 돼지수포병 바이러스 단클론 항체 = 117 2) 유효성 평가에 사용된 돼지수포병바이러스 = 117 3) 유효성 평가에 사용된 세포주 = 117 4) 간접형광항체법 = 118 2. 결과 및 고찰 = 121 Ⅱ-2. 아프리카돼지콜레라 진단제제 (PCR primer 및 p12 antigen) 유효성 평가 = 123 1. 재료 및 방법 = 123 1) ASFV p12 항원 및 야외혈청 = 123 2) 양성 및 음성 혈청 = 123 3) 아프리카돼지콜레라바이러스 DNA 분리 = 123 4) 아프리카돼지콜레라바이러스 유전자증폭 = 125 5) Indirect ELISA = 127 2. 결과 및 고찰 = 128 1) PCR법에 의한 ASFV특이 유전자 검출 = 128 2) 유전자재조합 ASFV p12 발현단백질 항원의 항원성 조사 = 129 Ⅱ-3. 가성우역 진단제제 (mAb 및 synthetic peptides) 유효성 평가 = 132 1. 재료 및 방법 = 132 1) 합성펩타이드절편 = 132 2) 우역 및 가성우역 혈청 = 132 3) 가성우역 N단밸질특이 단클론항체 및 평가 N 단밸직 항원 = 133 4) Peptide ELISA = 133 5) Indirect ELISA = 135 6) Competitive ELISA = 135 2. 재료 및 고찰 = 135 1) 합성펩타이드의 우역 및 가성우역항체와의 반응성 평가 = 135 2) 국내작성 가성우역 단크ffhsgkdcp에 대한 반응성 평가 = 138 Ⅱ-4. 가성우역과 우역 병인체 감별진단을 위한 RT-PCR 진단법 = 142 1. 재료 및 방법 = 142 1) PCR primer sets = 142 2) 검사용 항원조직 샘플 = 142 3) 감염조직으로부터 genomic RNA 추출 = 143 4) cDNA 합성 = 143 2. 결과 및 고찰 = 145 Ⅱ-4. 소해면상뇌증 진단제제 (mAb 및 prion) 유효성 평가 = 146 1. Prionics kit를 이용한 BSE prion 신속검출방법 = 146 2. 국내개발 Prion 재조합단백질 및 Prionxmr이 단클론항체의 유효성 평가 = 148 1) 시약 및 재료 = 148 2) Prion 재조합 단밸질 및 Prion 특이 단클론 항체의 반응성 평가 = 148 3) Prion 특이 단클론 항체의 prionrjacnf 민감도 평가 = 149 Ⅲ. 종합결과 = 150 Ⅳ. 적요 = 151 Ⅴ. 참고문헌 = 151 |